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精子DNA损伤检测试剂-甲苯胺蓝染色法备

甲苯胺蓝是一种经典的细胞核(阳离子)染料。 甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料总体呈负电荷。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 正常的精子核的主要核蛋白与其中的阳离子相结合而被染成淡蓝色;而染色质异常的精子核含有较多的鱼精蛋白等物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性,染成深蓝色或紫红色。

 

主要组成成分:甲苯胺蓝、乙醇、磷酸盐缓冲液。
储存条件及有效期:4-6℃保存一年。
适用仪器:常规显微镜。
样本要求:新鲜精液。
【检验方法】
实验前的试剂准备:
⑴.C液(固定液)由C1液和C2液等量混合,并在4℃下冷却至少30min。
 ⑵.G液(染色液):用前由9.5ml E液(染色稀释液)和0.5ml F液(染色储存液)混合而成。

1.精液液化后,用A液(洗涤液)与精液样本混合均匀,2400rpm离心10分钟,弃去上清,留下精子沉淀团,再用B液(标本稀释液)调节浓度至200 x 106个/ml。
2.然后在干净的载玻片上制备薄涂片,待玻片自然干燥后,浸泡C1液30min,再用C2液清洗,然后空气干燥30分钟。
3.干涂片用C液(固定液)于4℃环境下固定30min,待空气自然干燥12小时后,滴加D液(变性液)覆盖玻片并在4℃下孵育5min。
4.用蒸馏水漂洗3次,每次1min,之后在室温下用G液(染色液)染色5min,流水轻轻冲洗,空气干燥。
5.在油镜下分析计数200个精子细胞,染色质完整的细胞(TB-)显淡蓝色,染色质完整性降低的细胞(TB+)显深蓝色或紫色。如下图:
【参考值】TB+细胞>45%:精子染色质完整性差。
【注意事项】精子染色液试剂盒为体外诊断试剂,染色结果仅供临床参考。
产品编号:GC-TB-20  20人份

 
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