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精子染色液(SCSA法)


      精子DNA碎片率反映了精子遗传物质DNA的损伤程度,检测精子精液碎片率对精子功能有重要的意义。精子DNA损伤会造成精子质量下降、受精率降低、植入前胚胎发育受损、流产率增加及子代遗传性疾病发育力提高。
      利用染色质异常的精子易变性成单链DNA,   与染料吖啶橙结合发红色荧光;而正常染色质的精子能保持完整的DNA双链结构,与吖啶橙结合发绿色荧光这一特性。样品在经过变性处理后,若红光值比例增高,就说明染色质结构异常增加。

       

精子染色液(SCSA法)跟scd法比具有方便快捷,准确度高的优势。

试剂组成:
A液:精子稀释液             
B液:破膜剂     
C1液:吖啶橙浓缩染色液            
C2液:染色稀释液
样本要求:新鲜或冷冻精液
储存条件及有效期:2-8℃保存9个月

适用仪器:流式细胞仪

检验方法:
试剂准备:将全部C1液加到C2液中,用Tip反复吹打数次,得到C液(C液在4℃可保存两个星期)

实验步骤: 
(一)精子标本液化后,测定精子浓度,然后用A液快速稀释精子,使精子浓度为1~2x106个/mL。
(二) 校准流式细胞仪和设定流动室,使精子的流速达到200个/sec。
(三)测定步骤:
1.在流式细胞仪的进样管中加入50μL浓度为1~2x106个/mL的精子细胞。
2.再加入100μL的B液(细胞置于冰上操作)。
3.准确计时30Sec之后,加入300μL C液,混匀。
4.将已经染好色的样品加入样品室,样品进入样品室之后应该立即启动样品流。
5.用秒表立即开始计时,样本数据读取时间设定为3min(如果流动速度太快,细胞流速大于300个/秒,就应该重新用A液稀释样品)。
6.按照以上步骤,继续测定下一个标本(每一天或测定不同的样本之后都要进行微调)。
7.最后清洗样品线。

参考值:
精子DNA碎片指数(DFI)≤15% :精子DNA完整性好
15%>精子DNA碎片指数(DFI)<30%:精子DNA完整性一般
精子DNA碎片指数(DFI)≥30%:精子DNA完整性差

HDS:
 a.HDS ≤15%:精子成熟染色质含量正常
 b.HDS  >15%:精子成熟染色质含量异常

产品编号:GC-SCSA-20G  20人份

 
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